BBM Magazine Issue-Sayı: 55 August - Ağustos 2022

65 ARTICLE • MAKALE BBM / AĞUSTOS 2022 • AUGUST 2022 rotavapor apparatus at 40 °C, which is used for the recov- ery of lipids from the solution to near dryness. The mass of the extracted lipids obtained was determined by calculat- ing the extraction yield. Moreover, the percent of lipid content in the sample was calculated using Equa- tion (1), Where mextract is the mass of lipids weighed after evap- orating the petroleum ether, and mflour sample is the mass of flour used for lipid extraction. 2.4. Monitoring of Enzyme Activity The activity of a specific enzyme was determined based on enzymatic activity assays using a UV-spectrophotom- eter (Varian, Cary 50 Probe, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) at different wavelengths. The α-amylase activity was determined based on the in- crease in the amount of glucose in the solution by using the DNS reagent (3,5-dinitrosalicylic acid). The absorbance was measured with a UV-Vis spectrophotometer at a wave- length of 540 nm. The activity of lipase was determined based on P-nitro- phenol (pNP) reaction, which was monitored at 400 nm for 5 min. One unit of lipase activity released 1 nanomole of p-nitrophenol per minute at pH 7.2 and 37 °C using p-nitro- phenyl butyrate (PNPB) as the substrate. The protease activity was measured using casein as a substrate. The procedure for the determination of the pro- tease activity was described previously in research. The peroxidase activity was measured using phenol, 4-aminoantipyrine (4-AAP), and hydrogen peroxide as sub- strates. The method for peroxidase activity determination and a detailed calculation procedure of peroxidase activity has been published in our previous research. The residual activities of different enzymes were calculated using the follow- ing Equation (2). All experiments were carried out in triplicate, and the mean values express the average ± standard deviation. Statistical Analysis R version 4.1.1 and Rstudio, version 1.4.1717 were used to perform the statistical analysis and evaluate the dif- ferences between the residual enzyme activity within Ayrıca numunedeki lipid içeriğinin yüzdesi Denk- lem (1) kullanılarak hesaplanmıştır. Burada M extract, petrol eteri buharlaştırıldıktan sonra tartılan lipitlerin kütlesidir ve M un numu- nesi, lipit ekstraksiyonu için kullanılan un kütlesi- dir. 2.4. Enzim Aktivitesinin İzlenmesi Spesifik bir enzimin aktivitesi, farklı dalga boyla- rında bir UV-spektrofotometre (Varian, Cary 50 Pro- be, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, ABD) kul- lanılarak enzimatik aktivite deneylerine dayanarak belirlendi. α-amilaz aktivitesi, DNS reaktifi (3,5-dinitrosalisilik asit) kullanılarak çözeltideki glikoz miktarındaki artı- şa dayalı olarak belirlendi. Absorbans, 540 nm dal- ga boyunda bir UV-Vis spektrofotometre ile ölçüldü. Lipaz aktivitesi, 5 dakika boyunca 400 nm'de izle- nen P-nitrofenol (pNP) reaksiyonuna göre belirlendi. Bir birim lipaz aktivitesi, substrat olarak p-nitrofenil butirat (PNPB) kullanılarak pH 7.2 ve 37 °C'de daki- kada 1 nanomol p-nitrofenol salmıştır. Proteaz aktivitesi, bir substrat olarak kazein kul- lanılarak ölçüldü. Proteaz aktivitesinin belirlenmesi için prosedür daha önce tarif edilmişti. Peroksidaz aktivitesi, substrat olarak fenol, 4-ami- noantipirin (4-AAP) ve hidrojen peroksit kullanılarak ölçüldü. Peroksidaz aktivitesini belirleme yöntemi ve peroksidaz aktivitesinin ayrıntılı bir hesaplama prosedürü önceki araştırmamızda yayınlanmıştır. Farklı enzimlerin kalıntı aktiviteleri aşağıdaki Denklem (2) kullanılarak hesaplandı. Tüm deneyler üç kop- ya halinde gerçekleştiril- di ve ortalama değerler ortalama ± standart sap- mayı ifade ediyor. İstatistiksel Analiz R versiyonu 4.1.1 ve Rstudio, versiyon 1.4.1717, istatistiksel analizi gerçekleştir- mek ve iki yönlü bir performanstan sonra doğal formdaki ve scCO2 ile muamele edilmiş unda en- zim türleri içindeki kalıntı enzim aktivitesi arasın- daki farkları değerlendirmek için kullanıldı. varyans